25. člen
(testiranje in določanje s tekočinsko kromatografijo visoke ločljivosti)
Kromatografski pogoji so navedeni samo kot napotek.
a)
Oprema
1.
Tekočinski kromatograf visoke ločljivosti, ki ima:
-
10 mikrol injektor,
-
detektor: diferencialni refraktometer ali interferometer refraktometer,
-
kolono s silikagelom, na katerem je kemijsko vezan alkilamil (dolžina 25 cm, notranji premer 4 mm),
-
predkolono, napolnjeno z isto fazo,
-
pripravo za izoliranje predkolone in analitskih kolon ali za vzdrževanje njihove temperature (30 °C),
-
rekorder in po potrebi integrator,
-
hitrost pretoka mobilne faze 1 ml/min.
2.
Priprava za membransko filtriranje (0,45 mikrom).
b)
Reagenti
-
Dvakrat destilirana voda.
-
Acetonitril (CH(3)CN) HPLC kakovosti.
-
Mobilna faza: acetonitril: voda, ki jo pred tem filtriramo z membranskim filtrom (0,45 mikrom), 80:20 (vol: vol).
Iz mobilne faze je treba pred uporabo odstraniti raztopljene pline.
-
Standardna raztopina: 1,2 g/l vodne raztopine saharoze. Filtriramo z 0,45 mikrom membranskim filtrom.
c)
Postopek
1.
Priprava vzorca:
-
za vino in mošt: filtriramo z 0,45 mikrom membranskim filtrom,
-
za prečiščen zgoščen grozdni mošt: uporabimo raztopino, ki jo dobimo tako, da prečiščen zgoščen mošt razredčimo do 40%, kot je opisano v drugi alinei točke d) 1. 11. člena tega navodila in filtriramo z 0,45 mikrom membranskim filtrom.
2.
Kromatografsko določanje
V kromatograf vbrizgamo 10 mikrol standardne raztopine in nato 10 mikrom vzorca, pripravljenega kot je opisano v točki c)1. tega člena. Vbrizgavanje ponovimo v istem vrstnem redu.
Zapišemo kromatogram.
Retencijski čas saharoze je približno 10 minut.
d)
Izračuni
Za izračun uporabimo povprečje rezultatov za standardno raztopino in vzorec.
-
Za vina in mošt: koncentracije izračunamo v g/l.
-
Za prečiščen zgoščen grozdni mošt: C je koncentracija saharoze v g/l v 40% raztopini prečiščenega zgoščenega mošta. Koncentracija saharoze za prečiščen zgoščen grozdni mošt v g/kg je tako 2,5 × C.
e)
Izražanje rezultatov
Koncentracija saharoze v vinu, moštu in prečiščenem zgoščenem moštu se izraža v gramih na liter za vina in mošt ter v gramih na kilogram za prečiščen zgoščen grozdni mošt, na eno decimalko natančno.