24. člen
(kvalitativno testiranje s tankoplastno kromatografijo)
a)
Oprema
-
Kromatografska plošča, na katero nanesemo sloj celuloznega prahu v željeni debelini (npr. MN 300; 20x20).
-
Kromatografska posoda (tank).
-
Mikrometrična igla ali mikropipeta.
-
Pečica z regulacijo do 105 + / - 2°C.
b)
Reagenti
-
Oglje za razbarvanje.
-
Mobilna faza: diklorometan: 100% ocetna kislina (ledocet) (ro(20) = 1,05 g/ml): etanol: metanol: voda, 50: 25: 9: 6: 10.
-
Sredstvo za razvijanje:
sečnina: 5 g,
klorovodikova kislina, 2 M: 20 ml,
etanol: 100 ml.
-
Referenčne raztopine
glukoza: 35 g,
fruktoza: 35 g,
saharoza: 0,5 g,
destilirana voda: 1000 ml.
c)
Postopek
-
Priprava vzorca
Če je mošt ali vino močno obarvano, ga razbarvamo z aktivnim ogljem.
Za prečiščeni zgoščeni mošt uporabimo raztopino z masnim deležem sladkorja 25%(m/m) ali 25 °Brix, pripravljeno kot je opisano v drugi alinei točke c)1. 15. člena tega navodila in ga razredčimo z vodo na četrtino koncentracije, tako da 25 ml mošta v merilni bučki dodamo vodo do 100 ml.
-
Izdelava kromatograma
2,5 cm od spodnjega roba plošče nanesemo kot črtico 10 mikrol vzorca in 10 mikrol standarda.
Ploščo postavimo v posodo (tank), ki je bila pred tem nasičena s hlapi mobilne faze. Pustimo, da mobilna faza pripotuje do višine 1 cm od gornjega roba plošče. Ploščo vzamemo iz posode in jo osušimo v toku toplega zraka. Postopek ponovimo še dvakrat in ploščo vsakič osušimo. Ploščo enakomerno orosimo s 15 ml razvijalca barve in jo za približno pet minut postavimo v pečico, ogreto na 105 °C.
d)
Rezultati
Saharoza in fruktoza se pojavita kot temnomoder madež na belem ozadju, glukoza pa kot manj intenziven zelen madež.