4. člen
(zbiranje, pridobivanje in priprava zarodkov)
Dovoljena je uporaba zarodkov, ki jih je zbrala, pridobila, pripravila in shranila skupina, in ki niso bili v stiku z zarodki nižjega zdravstvenega standarda.
Živali darovalke, od katerih se zarodki pridobivajo, morajo biti v času zbiranja ločene od ostalih živali v reji, v prostoru, ki ga je mogoče mokro čistiti in razkuževati.
Zarodki se pripravljajo samo v posebnem prostoru laboratorija oziroma v (čistem) delu mobilnega laboratorija.
Vse, kar pride v kontakt z zarodki ali darovalkami, mora biti pred uporabo razkuženo ali sterilizirano.
Vsi dodatki živalskega porekla, ki se uporabljajo v procesu zbiranja, pridobivanja, priprave, presajanja in shranjevanja zarodkov, ne smejo predstavljati nevarnosti za okužbo zarodka. Mediji in raztopine morajo biti pred uporabo sterilizirani z metodami, ki jih je priporočilo Mednarodno združenje za prenos zarodkov (International Embryo Transfer Society – v nadaljnjem besedilu: IETS). Priporočilo združenja velja tudi za dodajanje antibiotikov v medije.
Vsa laboratorijska steklovina mora biti pred uporabo sterilizirana.
Tekoči dušik in podobne snovi, v katerih se zarodki zamrzujejo, se predhodno ne smejo uporabljati za zamrzovanje drugih proizvodov živalskega porekla.
Vsaka posamezna slamica z zarodki in posode za shranjevanje morajo biti ustrezno označeni oziroma šifrirani tako, da je mogoče določiti datum pridobivanja in zamrzovanja, vrsto in pasmo živali, identifikacijsko številko darovalke in očeta zarodka ter veterinarsko registrsko številko skupine.
Pred presaditvijo ali zamrzovanjem morajo biti jajčne celice ali zarodki vsaj desetkrat preprani v sterilnem mediju s širokospektralnim antibiotikom, količina medija mora biti najmanj stokrat večja od količine medija z jajčno celico ali zarodkom. Za vsako prepranje v sterilnem mediju se mora uporabiti druga sterilna mikropipeta ali mikropipeta za enkratno uporabo. Načini in postopki prepranja zarodkov (dodajanje tripsina) se izvajajo v skladu s priporočili IETS.
Po zadnjem prepranju morajo biti jajčne celice ali zarodki pregledani z mikroskopom pod najmanj 50-kratno povečavo. Ovojnica (zona pelucida) ne sme biti poškodovana, na njej pa ne smejo biti prisotne nobene celice ali tuji delci. Uporaba jajčnih celic ali zarodkov s poškodovano ovojnico je dovoljena le, če je:
-
poškodba nastala pri mikromanipulaciji v sterilnem okolju in če so bile jajčne celice ali zarodki pred postopkom mikromanipulacije z nepoškodovano zono pelucido predpisano obdelani;
-
poškodba nastala pri zamrzovanju oziroma odtajanju jajčnih celic ali zarodkov, ki so bili pred zamrzovanjem predpisano obdelani.
Vsi zarodki, ki so po pregledu iz prejšnjega odstavka ustrezni, morajo biti shranjeni v sterilnih zaprtih slamicah ali posodah za shranjevanje, ki so predpisano označene oziroma šifrirane.
Vsi ustrezni zarodki, ki se zamrzujejo morajo biti zamrznjeni v čim krajšem času po pregledu in shranjeni v prostoru, ki je pod kontrolo vodje skupine.
Skupina mora vsaj eno leto shranjevati vzorce raztopine za izpiranje zarodkov, raztopine za prepiranje zarodkov, poškodovanih in neuporabnih zarodkov, neoplojenih jajčnih celic za potrebe nadzora.